一、細(xì)菌生化檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)介紹
石蕊既是pH指示劑又是氧化還原指示劑。在酸性溶液（pH 4.5）中為紅色，在堿性溶液（pH 8.3）中為藍(lán)色。介質(zhì)的自然色應(yīng)為紫藍(lán)色（pH 6.8）。石蕊可以被某些細(xì)菌還原為無色基質(zhì)。
牛奶含有乳糖和三種主要蛋白質(zhì)，即酪蛋白，牛奶蛋白質(zhì)和乳球蛋白。
牛奶凝結(jié)主要是由含有凝乳酶的細(xì)菌引起的，凝乳酶可將酪蛋白轉(zhuǎn)化為酪蛋白，或由于乳糖發(fā)酵產(chǎn)生大量酸而導(dǎo)致酪蛋白沉淀。
一些細(xì)菌產(chǎn)生脂肪酶，脂肪酶可以分解牛奶中的脂肪，形成黃色透明液體。
一些細(xì)菌具有酪蛋白水解酶，可以催化酪蛋白水解，最終將其轉(zhuǎn)化為透明的液體酪蛋白沉淀。此過程稱為肽化。
二、細(xì)菌生化檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)試劑
| 序號 | 產(chǎn)品 | CAS號 | 備注 |
| 1 | 脫脂奶粉 | ||
| 2 | 石蕊 | 1393-92-6 | |
| 3 | 水 | ||
| 4 | 乙醇 | 64-17-5 |
脫脂奶粉100.0克，石蕊屬，水1000.0 mL
三、細(xì)菌生化檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)步驟
將奶粉完全溶解在水中，調(diào)節(jié)至pH 6.8，添加石蕊溶液，直到其呈現(xiàn)紫藍(lán)色（pH 6.8），分成試管，每管約5 mL。在115°C下滅菌10分鐘，迅速冷卻，然后放入冰箱中以備后用。
石蕊溶液的制備方法：稱取2.5 g石蕊，在碗中研磨，轉(zhuǎn)移到裝有40％乙醇水溶液的50 mL燒瓶中，煮沸1分鐘，靜置約10分鐘，吸取上清液并將其轉(zhuǎn)移到另一個在燒瓶中，向原始燒瓶中加入50 mL 40％的乙醇水溶液，煮沸1分鐘。
將上清液添加到之前的上清液中，將兩種上清液均勻混合，離心沉淀，將上清液倒入100 mL量筒中，用40％乙醇補(bǔ)足100 mL，并逐滴加入1 M鹽酸直至溶液呈紫色，這是2.5％的石蕊溶液。
95％乙醇42.1 mL加水至100 mL是40％乙醇溶液。
3.測試方法
接種受試細(xì)菌的18-24小時(shí)培養(yǎng)物。如果是厭氧菌，則在培養(yǎng)基試管中加入無菌鐵屑或指甲，并蓋上無菌凡士林，然后在36±1℃下培養(yǎng)。 -14天。
四、細(xì)菌生化檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判斷
1.粉紅色：將乳糖發(fā)酵產(chǎn)生酸；
2.紫色藍(lán)色：乳糖經(jīng)過發(fā)酵并保持其原始顏色；
3.藍(lán)色：堿性反應(yīng)，乳糖發(fā)酵，細(xì)菌分解培養(yǎng)基中的含氮物質(zhì)產(chǎn)生堿性物質(zhì)；
4.白色：石蕊恢復(fù)了；
5.澄清：消化乳蛋白（蛋白糖化）；
6.凝塊會凝結(jié)：由于大量的酸產(chǎn)生，牛奶和雞蛋會凝結(jié)。
7.產(chǎn)氣：乳糖分解產(chǎn)生酸和氣體，強(qiáng)烈的發(fā)酵會破壞血凝塊。
如果沒有脫脂奶粉，則將新鮮的牛奶放在冰箱中過夜，去除奶油層，在流動的蒸汽中加熱和消毒脫脂奶1小時(shí)，冷卻至10攝氏度以下，用無菌紗布過濾，然后添加石蕊溶液直至熏衣草，分開試管并與以前一樣消毒。
