一、淀粉酶活性的測定實(shí)驗(yàn)原則：※ 淀粉酶（淀粉酶）包括幾個具有不同催化特性的成員。其中，α-淀粉酶隨機(jī)作用在淀粉的非還原端上，產(chǎn)生麥芽糖，麥芽三糖，糊精等還原糖，同時(shí)降低淀粉漿的粘度。因此，它也被稱為液化酶。每次β-淀粉酶都會從淀粉的非還原端切割出一個麥芽糖分子，也稱為糖化酶。葡萄糖淀粉酶每次都從淀粉的非還原末端切出一個葡萄糖。由淀粉酶產(chǎn)生的這些還原糖可以還原3，5-二硝基水楊酸以產(chǎn)生棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。淀粉酶活性的大小與產(chǎn)生的還原糖的量成正比?？梢杂名溠刻抢L制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并且可以通過比色法確定由淀粉產(chǎn)生的還原糖的量。在一定時(shí)間內(nèi)每單位重量樣品產(chǎn)生的還原糖量表示酶活性。
※ 淀粉酶幾乎存在于所有植物中，尤其是發(fā)芽后谷物種子的淀粉酶活性最強(qiáng)，主要是α-和β-淀粉酶。 α-淀粉酶不耐酸，在pH 3.6以下會迅速失活； β-淀粉酶不耐熱，在70°C滅活15分鐘。根據(jù)它們的特性，當(dāng)其中一個在測量過程中被停用時(shí)，可以測量另一個的生命力。在該實(shí)驗(yàn)中，通過加熱使β-淀粉酶失活來測量α-淀粉酶的活性，然后通過與在非鈍化條件下測得的總活性（α+β）進(jìn)行比較來確定β-淀粉酶的活性。
二、淀粉酶活性的測定材料，儀器和試劑
| 序號 | 產(chǎn)品 | CAS號 | 備注 |
| 1 | 麥芽糖 | 6363-53-7 | |
| 2 | 3,5-二硝基水楊酸 | 609-99-4 | |
| 3 | 氫氧化鈉 | 1310-73-2 | |
| 4 | 酒石酸鉀鈉 | 6381-59-5 | |
| 5 | 檸檬酸 | 77-92-9 | |
| 6 | 檸檬酸鈉 | 68-04-2 | |
| 7 | 石英砂 | 14808-60-7 | |
| 8 | 淀粉酶 | 9000-92-4 |
（1）材料：發(fā)芽的小麥種子（芽長約1cm）。
（2）儀器：1.分光光度計(jì)； 2.離心機(jī)； 3.恒溫水?。?7°C，70°C，100°C）； 4.試管帶有塞子刻度； 5.刻度移液器； 6.容量瓶。
（3）試劑（所有分析純）：
1.標(biāo)準(zhǔn)麥芽糖溶液（1mg / ml）：準(zhǔn)確稱取100mg麥芽糖，溶于蒸餾水，稀釋至100ml；
2. 3,5-二硝基水楊酸試劑：準(zhǔn)確稱取1g 3,5-二硝基水楊酸，溶于20ml 2mol / L NaOH溶液中，加50ml蒸餾水，再加30g酒石酸鉀鈉，待溶解后補(bǔ)足用蒸餾水稀釋至100毫升。緊密關(guān)閉塞子，以防止二氧化碳進(jìn)入。如果溶液渾濁，則可以在過濾后使用。
3.01mol / L檸檬酸緩沖液pH 5.6：溶液（0.1mol / L檸檬酸）：稱量21.01g C6H8O7.H2O，用蒸餾水溶解至1L； B溶液（0.1 mol / L檸檬酸鈉）：稱取29.41 g Na3C6H5O7.2H2O，用蒸餾水溶解，將體積調(diào)至1L。將55ml溶液A與145ml溶液B混合，該溶液為0.1mol / L檸檬酸緩沖液pH 5.6；
4.1％淀粉溶液：稱取1g淀粉，溶于100ml 0.1mol / L pH 5.6檸檬酸緩沖液中。
三、淀粉酶活性的測定實(shí)驗(yàn)程序（1）麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：取7個帶有塞尺的干凈試管，編號，并按表添加試劑（詳細(xì)的教學(xué)材料）。搖勻，在沸水浴中煮沸5分鐘。取出后，將自來水冷卻，并用蒸餾水補(bǔ)足至20 ml。將1號管作為空白零點(diǎn)，并在540nm波長處進(jìn)行比色法測量。以麥芽糖含量為水平坐標(biāo)，以吸光度值為垂直坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
（2）酶溶液的制備：稱取1g發(fā)芽3天的小麥種子（芽長約1cm），放入研缽中，加入少量石英砂和2ml蒸餾水，研成勻漿。將勻漿倒入離心管中，并用6ml蒸餾水將殘余物洗至離心管中。將提取物置于室溫下提取15-20分鐘，每隔幾分鐘攪拌一次以使其完全提取。然后以3000 rpm的速度離心10分鐘，將上清液倒入100 ml容量瓶中，加入蒸餾水使體積達(dá)到刻度，然后搖動成為淀粉酶的儲備液。吸取10毫升上述淀粉酶原液，將其放入50毫升容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，并搖勻以得到淀粉酶稀釋液。
（3）酶活性的測定：取6個帶有塞子秤的干凈試管，編號，并按照表（詳細(xì)的教學(xué)材料）進(jìn)行操作。
四、淀粉酶活性的測定實(shí)驗(yàn)結(jié)論：※ 結(jié)果的計(jì)算：淀粉酶活性＝ C×VT /（W×Vs×T）（mg / g / min）。式中，C為從標(biāo)準(zhǔn)曲線求出的麥芽糖含量（mg）。 VT是淀粉酶儲備溶液的總體積（毫升）； Vs是反應(yīng)中使用的淀粉酶儲備溶液的體積（ml）； W是樣品重量（g）； t它是反應(yīng)時(shí)間（分鐘）。
