液相色譜外標(biāo)法測(cè)定蔬菜中的維生素含量
維生素C是蔬菜中重要的營(yíng)養(yǎng)成分，其含量直接影響蔬菜的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和健康效果。高效液相色譜法（HPLC）是一種用于分離和分析極性和非極性化合物的色譜技術(shù)，具有快速、靈敏、準(zhǔn)確的特點(diǎn)。外標(biāo)法是通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線法或標(biāo)準(zhǔn)加入法來(lái)計(jì)算待測(cè)物質(zhì)的含量。
實(shí)驗(yàn)試劑
| 品名 | CAS |
| 草酸Oxalic acid | 144-62-7 |
| L-抗壞血酸L-Ascorbic acid | 50-81-7 |
實(shí)驗(yàn)步驟
1、流動(dòng)相的配制
????稱(chēng)取H?C?O??2H?O，溶解后過(guò)濾。
2、標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備
????準(zhǔn)確稱(chēng)取維生素C，加入草酸溶液，稀釋后過(guò)濾，配制成標(biāo)準(zhǔn)溶液。
3、試樣溶液的制備
????取新鮮蔬菜，切碎、混勻，加入草酸溶液，超聲波萃取，離心分離，過(guò)濾備用。
4、色譜分析條件
????1)色譜柱：C18（3.9 mm×250 mm，Nova-pak）。
????2)流動(dòng)相：0.1%草酸。
????3)流速：0.6mL?min?1。
????4)紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm。
????5)進(jìn)樣體積：20μL。
5、系列標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液的測(cè)定
????分別吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液，注入色譜柱進(jìn)行色譜分離，記錄色譜峰面積，計(jì)算含量。
實(shí)驗(yàn)小貼士:
1、本實(shí)驗(yàn)中如何確定試樣中維生素C的色譜峰？
????通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰進(jìn)行比較，確定試樣中維生素C的色譜峰。
2、標(biāo)準(zhǔn)曲線法中是否可以用峰高代替峰面積進(jìn)行定量分析？為什么？
????可以用峰高代替峰面積進(jìn)行定量分析，因?yàn)榉甯吲c峰面積成正比。然而，峰面積更準(zhǔn)確，因?yàn)樗灰蕾?lài)于色譜峰的形狀，且對(duì)基線漂移和噪聲的影響較小。因此，如果可能，建議使用峰面積進(jìn)行定量分析。
