如何選擇緩沖劑？
選擇緩沖系統(tǒng)時，緩沖液的pKa變化超過pH單元，緩沖能力明顯下降，緩沖系統(tǒng)不得影響蛋白質(zhì)的活性或DNA的穩(wěn)定性，避免其他離子的干擾。另外，考慮到溫度的影響，溫度不僅影響緩沖液，還影響細胞，很多動物細胞在37℃的生理狀況下pH為7.07.5，溫度下降到0℃時達到8.0。
一、磷酸鹽緩沖液的優(yōu)缺點:
磷酸鹽緩沖液是廣泛使用的緩沖劑，由于有二次解離，緩沖的pH值范圍廣，可配置各種pH值的酸性、堿性、中性緩沖液。
優(yōu)點:
容易配合各種濃度。
適用的pH范圍很廣。
pH受溫度的影響很小。
稀釋后pH的變化很小。
缺點:與常見的鈣離子、鎂離子和重金屬離子合成沉淀。
二、Tris緩沖液的優(yōu)缺點:
Tris緩沖液是生物化學研究中廣泛使用的緩沖劑，其本身是弱堿，常用的有效pH在中性范圍內(nèi)。
優(yōu)點:
堿性強，只有這種緩沖液可以配置從酸到堿的范圍pH緩沖液
對生物化學過程的干擾很小，不會沉淀鈣、鎂離子和重金屬離子
因為容易吸收空氣中的CO2，所以制作的緩沖液必須密封
該緩沖液對某個pH電極產(chǎn)生一定的干擾作用，因此使用與Tris溶液兼容的電極。
缺點:
pH受濃度影響較大，稀釋10倍，pH變化大于0.1。
溫度效應大，例如4℃時pH=8.4，37℃時pH=7.4。
三、HEPES緩沖液的優(yōu)缺點:
HEPES是非離子兩性緩沖液，在pH7.27.4范圍內(nèi)具有良好的緩沖能力，常用于生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒和PCR診斷試劑盒。
優(yōu)點:開放式培養(yǎng)和細胞觀察可以維持一定的pH值，對細胞沒有毒性作用。
缺點:高濃度時可能對細胞有毒，與其他緩沖劑相比價格稍高。
四、PIPES緩沖液的優(yōu)缺點:
PIPES是哌喹緩沖液家族的一員，與HEPES屬于同一家族。是兩性離子Goods緩沖液，在6.1到7.5的pH范圍內(nèi)有效。由于pH范圍與HEPES略有差異，因此PIPES的濃度HEPES濃度的一半。
優(yōu)點:
該緩沖劑不與金屬結(jié)合，可用于含有金屬離子的溶液
可用于色譜分析，電子顯微鏡固定植物細胞，替代草甘膦緩沖液。
缺點:
溶液的pH值上升到6.5以上時，PIPES的游離酸容易溶解，但PIPES的鈉鹽容易溶解
使用游離酸形式的緩沖液時，請使用氫氧化鈉將其轉(zhuǎn)化為鈉鹽，以提高在較低的pH下的溶解度
像HEPES一樣，PIPES不適用于與氧化還原反應相關(guān)的實驗。因為它會形成自由基。
